蛋白純化方法大全
蛋白純化的技術很複雜,以下就會大家熟知蛋白純化步驟。那為什麼蛋白質要純化呢,去掉蛋白質含有的一些雜質與其他蛋白質一起沉澱。那麼又要去除蛋白質的雜質又要保證蛋白質的營養不被流失,於是就要製作不同的方案來應對,稱為蛋白純化技術。根據蛋白的相似度和差異去除蛋白中的雜質!
1、粗分級分離
當蛋白質提取液(有時還雜有核酸、多糖之類)獲得後,選用一套適當的方法,將所要的蛋白與其他雜蛋白分離開來。一般這一步的分離用鹽析、等電點沉澱和有機溶劑分級分離等方法。這些方法的特點是簡便、處理量大,既能除去大量雜質,又能濃縮蛋白溶液。有些蛋白提取液體積較大,又不適於用沉澱或鹽析法濃縮,則可採用超過濾、凝膠過濾、冷凍真空乾燥或其他方法進行濃縮。
2樣品經粗分級分離以後,一般體積較小,雜蛋白大部分已被除去。進一步純化,一般使用層析法包括凝膠過濾、離子交換層析、吸附層析以及親和層析等。必要時還可選擇電泳法,包括區帶電泳、等電點聚焦等作為最後的純化步驟。用於細分級分離的方法一般規模較小,但分辨率很高。
3結晶是蛋白質分離純化的最後步驟。儘管結晶過程並不能保證蛋白一定是均一的,但是隻有某種蛋白在溶液中數量上佔有優勢時才能形成結晶。結晶過程本身也伴隨着一定程度的純化,而重結晶又可除去少量夾雜的蛋白。由於結晶過程中從未發現過變性蛋白,因此蛋白的結晶不僅是純度的一個標誌,也是斷定製品處於天然狀態的有力指標。
41.機械破碎法
這種方法是利用機械力的剪切作用,使細胞破碎。常用設備有,高速組織搗碎機、勻漿器、研缽等。
2.滲透破碎法
這種方法是在低滲條件使細胞溶脹而破碎。
3.反覆凍融法
生物組織經凍結後,細胞內液結冰膨脹而使細胞脹破。這種方法簡單方便,但要注意那些對温度變化敏感的蛋白質不宜採用此法。
4.超聲波法
使用超聲波震盪器使細胞膜上所受張力不均而使細胞破碎。
以上就是蛋白純化的步驟,給大家瞭解一下。這項技術目前在國內越來越先進,去除蛋白中的雜質讓蛋白更純粹。這是一項很複雜的技術有興趣的人可以多學習,要分離蛋白中的雜質還要純化裏面的蛋白,要製作出不同的方案,所以這項技術目前不斷的發展,未來蛋白純化的技術會越來越好。
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