饮用水中大肠杆菌检测方法是什么
大肠杆菌是比较常见的细菌,对于人体是有害的,常见于我们的饮用水当中,要是长时间的饮用含有大肠杆菌的水的话,对于身体的伤害是很大的。对此,要检查水中的大肠杆菌。那饮用水中大肠杆菌检测方法是什么?这个问题,很多的朋友都很好奇,下面就为大家简单的介绍一下。
饮用水中大肠杆菌检测方法是什么?
1、饮用水中大肠杆菌快速检测方法,其特征在于包括以下步骤:
(1)水样中微生物的收集及其DNA的提取: 采用灭菌后的滤膜或滤器过滤水样,在装有无菌水的EP管中,洗涤滤膜,离心, 弃上清液,备用;
(2)水样中微生物DNA的提取: A、向EP管中加入TE缓冲液,使之重悬; B、加入SDS和蛋白酶K,混匀,温育45min~1h; C、加入氯仿/异戊醇,混匀,离心,将上清液转入一个新EP管中; D、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇,混匀,离心,将上清液转入一个新EP管中; E、加入异丙醇,轻轻混合直到DNA沉淀下来,离心; F、弃上清,沉淀物用乙醇洗涤,晾干; G、将沉淀重溶于TE缓冲液,摇匀; H、用紫外分光光度计测定提取的基因组DNA模板的0D值,计算其DNA浓度,计算方 法为: DNA浓度(μg/μL)=OD值260nm×样品稀释倍数×50/1000 I、将基因组DNA模板做好标记,贮存,备用;
(3)PCR扩增; 反应引物: 上游引物:5’-tgttcagtggcaagagtt-3’ 下游引物:5’-taatcgatatacccgctc-3’ 50μL反应体系: 10×PCR缓冲液5μL Tag酶2U/μL1μL MgCl2(25mM)5μL dNTP(2.5MM)5μL ddH2029μL 上游引物10μM2μL 上游引物10μM2μL 模板DNA1.5μg/μL1μL
(4)产物观察: A、凝胶的准备:先配置琼脂糖溶液,加热,使其充分溶解,再加入溴化乙锭溶液; B、配置TAE电泳液; C、倒胶:将配置好的琼脂糖溶液倒入胶板中,待其凝固后,放入电泳槽中; D、电泳:将扩增好的PCR产物与缓冲液按比例混合,加入到凝胶加样孔中,同时加入 DNA分子量标准,接通电源,设定电压和电流,开始电泳。 E、观察;将扩增产物在紫外光下观察,拍摄图片。
上文就是关于饮用水中大肠杆菌检测方法是什么的介绍,现在大家了解了吧!其实可要我们不喝生水,饮用经过烧开的水,就没有这些问题了。这就是为什么总是提倡大家和凉开水的原因。而且多喝凉开水对身体是很有好处的,无论是男女老少。
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