乳酸脱氫酶測定方法
我們知道,現實生活中存在着各種各樣的的酶,這些酶可以單獨作用,也可以相互作用,對我們的人體產生很大的影響,但是相信大家對於酶的測定方法還不是很熟悉吧,不同酶的測定有不同的方式方法,而且方式方法也種類不一,現如今乳酸脱氫酶測定方法成為很多人研究的領域話題,那麼到底該如何測定呢,下面就讓我們一起來了解一下乳酸脱氫酶測定方法吧。
方法:
實驗開始前,請提前配置好所有試劑,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時儘量避免起泡。每次檢測都應該做標準曲線。如樣品濃度過高時,用樣品稀釋液進行稀釋,以使樣品符合試劑盒的檢測範圍。
1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl,餘孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加於酶標板孔底部,儘量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。
為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩幹,不用洗滌。每孔加生物素標記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標記抗體加99μl生物素標記抗體稀釋液的比例配製,輕輕混勻,在使用前一小時內配製),37℃,60分鐘。
3. 温育60分鐘後,棄去孔內液體,甩幹,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩幹。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標記親和素工作液(同生物素標記抗體工作液) 100μl,37℃,60分鐘。
5. 温育60分鐘後,棄去孔內液體,甩幹,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩幹。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內,此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,後3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。終止液的加入順序應儘量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結果的準確性,底物反應時間到後應儘快加入終止液。
8. 用酶聯儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液後15分鐘以內進行檢測。
以上內容為我們介紹了乳酸脱氫酶測定方法,我相信這些內容可以引起大家的興趣,我相信大家可以有效的最快的直接的測定出乳酸脱氫酶,可能你也是一個研究愛好者,那就趕快去實踐一翻吧!
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